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沉降系數(shù)是衡量大分子沉降速度的量度,沉降系數(shù)越大越容易沉降。大分子沉降速度的量度,等于每單位離心場的速度;騭=v/(ω2?r)。s是沉降系數(shù),ω是離心轉(zhuǎn)子的角速度(弧度/秒),r是到旋轉(zhuǎn)中心的距離,v是沉降速度。沉降系數(shù)以每單位重力的沉降時(shí)間表示。
沉降系數(shù)通過分析離心機(jī)測定。
通常只需要幾十毫克甚至幾十微克樣品,配制成1~2毫升溶液,裝入分析池,以幾小時(shí)的分析離心,就可以獲得一系列的樣品離心沉降圖。根據(jù)沉降圖可以作樣品所含組分的定性分析,亦可以測定各組分的沉降系數(shù)和估計(jì)分子大小,作樣品純度檢定和不均一性測定,以組分的相對含量測定。
(1)樣品:蛋白質(zhì)
(2)樣品溶液與離心:將樣品溶于緩沖液中,用一定規(guī)格的雙槽分析池,一邊加入溶液一邊加入溶劑。分析池與衡池衡重量,使衡池比分析池輕0.5g以內(nèi),然后分別裝入分析轉(zhuǎn)頭。抽真空。開Schlieren光光源,選擇工作速度,室溫離心。轉(zhuǎn)動腔達(dá)到真空后離心機(jī)開始運(yùn)轉(zhuǎn)加速,此時(shí)在觀察窗口可以看到離心圖型。達(dá)到工作速度后恒速離心。
以蛋白質(zhì)為例待看到樣品峰的尖端后即可以間隔照相。照完相即可關(guān)機(jī),取出樣品液,清理轉(zhuǎn)頭和分析池。照相用強(qiáng)反差顯影沖洗后即得Schlieren光路沉降圖形照片。
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